怎樣選擇高效液相色譜柱
現(xiàn)代高效液相色譜柱中,分離效果好壞很大程度上取決于色譜柱填料的選擇中。但是色譜柱填料的選責(zé)范圍很寬,要做合適的選擇,必須對此有一定的認(rèn)識和了解。今天小編就講講兩種常規(guī)的材料的色譜質(zhì)填料。
一、硅膠基質(zhì)填料
1、正相色譜
正相色譜用的固定相通常為硅膠(Silica),以及其他具有極性官能團(tuán),如胺基團(tuán) (ZH、APS)和氰基團(tuán)(CN、CPS)的鍵合相填料。由于硅膠表面的硅羥基(SiOH)或其他團(tuán)的極性教強,因此,分離的次序是依據(jù)樣品中的各組份的極性大小,即極性強落的組份最先被沖洗出高效液相色譜柱。正相色譜使用的流動相極性相對比固定相低,如:正乙烷、氯、二氯甲烷等。
2、反相色譜
反相色譜填料常是以硅膠為基礎(chǔ),表面鍵合有極性相對教弱的官能團(tuán)的鍵合相。
反相色譜所使用的流動相極性教強,通常為水,緩沖液與甲醇,已腈等混合物。
樣品流出色譜柱的順序是極性教強組合最先被沖出,而極性弱的組份會在高效液相色譜柱上有更強的保留。常用的反相填料有C18(ODS)、 C8(MOS)、C4(B)C6H5等。
二、聚合物填料
聚合物調(diào)料多為聚苯乙烯-二乙烯基苯或聚甲基丙酸至等,其主要優(yōu)點是在PG值為1-14均可使用。相對與硅膠基質(zhì)的C18填料,這類填料具有更強的淑水性;大孔的聚合物填料對蛋白質(zhì)等樣品的分離非常有效?,F(xiàn)在的聚合物填料的缺點是相對硅膠基質(zhì)填料,高效液相色譜柱柱效教低。